肉的宰后嫩化其主要归因于肌原玻纤节构的损坏，肌原玻纤节构是由内源性血清酶质血清酶质电离酶化学生物降解肌原玻纤和生殖血細胞骨架血清酶质导致的的。与十几年来长期是重视关键的钙血清酶质酶各个，胱天血清酶质酶（caspases）这两天为感想象力情况下题。胱天血清酶质酶在生殖血細胞凋亡的继续执行时候起着至关关键的的功效，在当中caspase-3在死了血清酶质血清酶质电离中的的功效是各方便和繁复的，于是适合进十步学习。S-亚硝基化按照调准钙降低、技能产生、血清酶质质化学生物降解和生殖血細胞凋亡来调准肉质地，以及嫩度和持水技能。现已学习察觉到S-亚硝基化可上涨忽略线粒体的caspase-3级联影响，这几率是肌肤生殖血細胞凋亡和鸡肉好品质变的原故。caspase-3的学习关键是其与生殖血細胞凋亡的问题，显然，很多有学习浅议S-亚硝基化调准caspase-3的体制。

2024年9月由无锡绿植基地二本大学张万刚院士项目团队在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱生物体为该研究提供了亚硝基化淡化组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

中文字幕标题文字：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

期刊论文：Journal of Agricultural and Food Chemistry

202多年影响到细胞因子：5.7

发过時间：2024年9月

投资者公司的：南京农业大学

论述物料：蛋白

拜谱具备技术水平：亚硝基化修饰组学

技术应用自驾路线：

一、探索导致

01.Caspase-3化学活化

当今尚不明了NO对caspase-3的阻止功效什么情况下归因于NO介导的S-亚硝基化，各种不同质量浓度均值的GSNO成为外源性NO出售，以诱发caspase-3的休外S-亚硝基化。结果显示反映，与就没有GSNO的组较之，100、200和400μM GSNO组的caspase-3亲水性明显减小（图1），与事先通讯报道一致性。GSNO加工减小caspase-3亲水性的潜在性现象仍急待表明。

图1 不一样的有机废气浓度的GSNO正确处理对caspase-3特异性的关系

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化成度

调查Caspase-3的亚硝基化地步，以确立GSNO对Caspase-3的想法性。经GSNO清理后，查测到caspase-3核蛋白S-亚硝基化力度曾加（图2）。这样毕竟表面，外源性GSNO训练可成功创业引发caspase-3的体内S-亚硝基化。让人特别的是，在不GSNO出现的参考组中查测到一家不大的S-亚硝基化带，这表面caspase-3会发生了内源性的S-亚硝基化。与此同时，本调查中caspase-3的S-亚硝基化地步较高，而caspase-3的吸附性缩减，这与先前的调查不符。殊不知，caspase-3的活性朋友S-亚硝基化修饰语位点尚不弄清楚，还要求加强组织领导骤的探秘。

图2 GSNO加工对caspase-3S-亚硝基化平均水平的会影响

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化呈现组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的字段。橙色记号的字段标识S-亚硝基化肽，红色的记号的C标识S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱分析

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3生物降解结淀粉酶

结球血清质有所作为另外一种最主要的细胞膜系骨架球血清质，在恢复肌细胞膜系空间组成部分的空间组成部分完美性和拉伸性领域起着最主要的功效，探究S-亚硝基化caspase-3对结球血清质吸附的刺激性性享有最主要价值。与Std（未用胱天球血清质酶-3和GSNO孵育的初始状态肌氯纶棉球血清质）组相对，0 μM GSNO组（肌原氯纶棉和caspase-3的孵育，无GSNO）的完美结球血清质份量显著性减低，信息提示caspase-3对结球血清质享有暗藏的球血清质电离的能力。在GSNO孵育后，完美结球血清质的份量严重加剧（P < 0.05）。于此，当GSNO质量浓度偏高时，完美结球血清质的份量继续上浮（P < 0.05）（图5）。一种显示发现，SNO体现的caspase-3以标准依懒的方式英文可以抑制结球血清质的吸附。

图5.S-亚硝基化caspase-3吸附结蛋白质

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3化学降解肌钙蛋白质-T

肌钙血清-T (TnT)是原肌球血清改善担任背部肌肉做收缩的细条的必须肌原玻纤血清。TnT的挥发同质性特点是监测到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化条件下，caspase-3对TnT的挥发时候如图是6随时，与Std组（不会caspase-3和GSNO的肌原玻纤）较之，caspase-3组中30 kDa TnT片断同质性扩大，认为caspase-3参与者了TnT的挥发，最后，caspase-3与GSNO的孵育引发30 kDa TnT越来越低。在100和200 μM GSNO组相互不会监测到显眼的文化差异(P > 0.05)，而当GSNO的氧化还原电位以达到400 μM 时，该片断同质性少(P < 0.05)。以上发掘认为了SNO突显的caspase-3对TnT挥发的调控用途。结血清和TnT是caspase-3的皮肤敏感底物，而GSNO补救拉低caspase-3的生物酶很有可能引发肌原玻纤血清挥发情况拉低。笔者认为所论，NO引发的S-亚硝基化能采用突显半胱氨酸残基来改善caspase-3的生物酶，转而进一部影向其对结血清和TnT的血清油脂水解技能，导致影向鸡肉品格。

图6. S-亚硝基化caspase- 3吸附肌钙血清-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、个人总结

本讨论为了更好地讨论S-亚硝基化对caspase-3遮盖的危害以至于接下来对鸡肉肌原氯纶身体外挥发的危害。血清S-亚硝基化能能遮盖caspase-3的半胱氨酸残基，最终得以影响caspase-3化学活化降底，进一歩仰制了其对鸡肉肌原氯纶血清的血清淀粉水解的能力。

三、拜谱工作小结

探索方案所采用了酶活校正，亚硝基化绘制组学探索分析，WB等监测具体方法，出现 血清S-亚硝基化就可以绘制caspase-3的半胱氨酸残基，这引起了caspase-3亲水性的削减，并举几步抑止了其对鸡肉肌原合成纤维血清的血清核膳食纤维水解专业能力。本探索方案为讲解血清质亚硝基化对色泽的调节体制可以提供好几回个新的角度。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的淀粉酶质组学、体现淀粉酶质组学、代谢率组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸一系列类产品，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺硝化作用、total腐蚀替换、散布巯基，欢迎大家咨询！

基准资料：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663